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如何規(guī)范的操作數(shù)字PCR儀?來看看萊尚生物科技是怎么做的吧

更新時(shí)間:2021-03-29瀏覽:1586次
  數(shù)字PCR儀是一種核酸分子一致定量技術(shù)。目前有三種方法用于核酸分子的定量,普通PCR半定量通過灰度進(jìn)行定量;熒光定量PCR通過Ct(Cq)值進(jìn)行相對(duì)定量;數(shù)字PCR是較新的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量,是一種一致定量的方法。主要采用微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào),沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)數(shù)字PCR 反應(yīng)單元總數(shù)和有熒光信號(hào)的單元數(shù)以及樣品的稀釋倍系數(shù),就可以得到樣本的最初拷貝數(shù)(濃度)。
  注意:
  1. Sock時(shí),溫度應(yīng)設(shè)為10℃,時(shí)間不要超過30分鐘。溫度過高,時(shí)間過長,易導(dǎo)致儀器的損壞。
  2. 操作時(shí),要嚴(yán)格遵守以上原則,及時(shí)記錄儀器運(yùn)行的情況。
  保養(yǎng):
  1.樣品池的清洗
  先打開蓋子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體;打開PCR儀,設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行,讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5~10min即可。
  2.熱蓋的清洗
  對(duì)于數(shù)字PCR儀,當(dāng)有污染出現(xiàn),而且這一污染并非來自樣品池時(shí);或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí),需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔鏡干凈,無污物阻擋光路。
  3.儀器外表面的清洗
  清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂,但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對(duì)PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。
  4.更換保險(xiǎn)絲
  先將PCR儀關(guān)機(jī),拔去插頭,打開電源插口旁邊的保險(xiǎn)盒,換上備用的保險(xiǎn)絲,觀察是否恢復(fù)正常。
  維修:
  1.PCR儀器需要定期檢測(cè),視制冷方式而定一般半年至少一次。
  2.PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的,當(dāng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1~2℃時(shí),可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。
  3.PCR反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時(shí)間控制,要求越短越好,當(dāng)PCR儀的降溫過程超過60s,就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對(duì)風(fēng)冷制冷的PCR儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵;對(duì)其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
  4.一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí),不要輕易打開或調(diào)整數(shù)字PCR儀的電子控制部件,必要時(shí)要請(qǐng)專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。

聯(lián)系電話:
020-39921409

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